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免疫學(xué)工具酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫組化、WB講解
點(diǎn)擊次數(shù):537 更新時(shí)間:2025-03-03

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA

用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒(méi)有用到組織包埋、切片等技術(shù),這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上 開(kāi)始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,這就是“吸附"的含義。

免疫組化和elisa所用到的原理 大致相同,只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同,從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析,其靈敏度非常高。

免疫組化:

是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等),通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,來(lái)對(duì)組織(細(xì)胞)內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織,要在顯微鏡下觀察結(jié)果,可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。                                

western bolt (wb):

先要進(jìn)行SDS-PAGE,然后將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來(lái)檢測(cè)樣品,可以用于定性和半定量。


免疫學(xué)三大工具,免疫組化、Western bolt (wb)、ELISA,分別用于定位,定性和定量。
western blotting(wb) 可以看到特異性的條帶,但是定量比較煩:
elisa可以直接讀出濃度,但是如果抗體有非特異性結(jié)合,那得到的數(shù)值就不可信。
WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到,ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響,WB所檢測(cè)的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。
WB所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無(wú)能為力,一鍋端了。
WB所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的,ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講,WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定,而Elisa不行。WB一次處理量就是一塊膠版,10-20個(gè)樣品最多了。Elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本,可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度。WB操作常見(jiàn)的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點(diǎn)在Elisa上表現(xiàn)得要好得多。



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